Recomendações
Amostras devem ser entregues dessalinizadas, secas, armazenadas em microtubos plásticos (Eppendorf/Axygen) de 1,5 ou 2,0 mL, e devidamente identificadas (preferencialmente com numeração sequencial que permita fácil ordenação das mesmas).
Fornecer todas as informações pertinentes ao preparo das amostras: origem do material, tipo de digestão, massa de proteínas digeridas, tampões empregados, método de dessalinização, etc.
Para estimativa da massa total de proteínas, recomenda-se que antes da digestão seja feita uma dosagem, via métodos BCA ou Bradford.
Informar qual método de análise deverá ser empregado a cada amostra: DDA, DIA, PRM, TMT, etc.
A entrega das amostras deverá ser agendada por e-mail com a especialista responsável (mariana@iq.usp.br).
Podemos recomendar protocolos de preparo de amostras para proteômica (dosagem de proteínas, digestão, dessalinização, etc). Entre em contato conosco para maiores informações.
Dicas para o preparo das amostras
- uso de jaleco, luvas limpas, touca e/ou cabelo preso É ESSENCIAL para evitar contaminação das amostras por queratina e por polímeros comumente frequentes em produtos de uso diário, como detergentes, sabonetes, cremes, protetores solares, shampoos/condicionadores, etc
- limpar bancada de trabalho com etanol 70% antes de iniciar os protocolos de preparo das amostras, e manter ambiente de trabalho limpo
- a vidraria utilizada para preparo de amostras para proteômica não pode ter sido lavada com detergente
- evitar compartilhar soluções utilizadas para outros fins que não a espectrometria de massas de alta resolução
- utilizar reagentes grau LC-MS
- jamais utilizar frascos plásticos para armazenar soluções contendo ácido e/ou acetonitrila. Utilizar frascos de vidro para essas finalidades
- não pipetar ácido concentrado com ponteiras plásticas. Dar preferência a seringas do tipo Hamilton
- manter os microtubos abertos pelo menor tempo possível durante as pipetagens
- a excisão de bandas de gel deve ser feita com bisturi descartável, limpo, sobre superfície de vidro limpa e, de preferência, dentro de um fluxo laminar, para evitar a adesão de contaminantes ao gel (poeira, etc)